北方地区能种冬虫夏草吗？
人工培育有性冬虫夏草的现状
20年来，60多个科研单位、数千人在人工栽培冬虫夏草方面进行了大量的研究、实验和探索。云南、四川等地在高海拔地区小面积培育有性类型取得了成功经验，但由于周期长、推广对象少、投资大、收益低于高海拔地区自然采集等诸多因素，一直没有大面积推广。在云南、四川、浙江、甘肃、青海、北京、福建、广东、贵州、广西等省(市、区)的中低海拔地区，人工培育有性冬虫夏草的研究也开展了多年，虽然其中不少在某些方面取得了非常可喜的成果，如云南、四川两省在昆明、成都、重庆等地成功繁殖了蛾类昆虫。在浙江等地，蝙蝠蛾类昆虫已在室内繁殖成功；但由于没有解决虫菌接种和子体批量、重复生长的困难，不能称之为成功培养。离低海拔小面积、小批量、多次人工培育有性冬虫夏草的目标还很远。虽然有几家公司宣称已经成功在中低海拔批量培育出有性冬虫夏草，但实际上科学可信度极低。因为:
(1)目前还没有人能够长期稳定地分离培养出正宗的虫草真菌(即在培养基上反复长出大量的子座)。在青海、云南、四川、北京等地栽培了基质，但其子囊孢子很少或没有，生长不稳定，并不代表掌握了中低海拔有性人工栽培技术。
(2)冬虫夏草的人工无性培养技术相对容易掌握，在室内接种蝠蛾幼虫即可感染进入僵期，但完成有性形态并长出子座和子囊孢子的情况少见。
(3)除了海拔、气候、土壤、气压等环境因素外，细菌之间是否存在多菌感染？如果是复合感染，哪些细菌在起关键作用？它在什么时期与冬虫夏草一起发挥作用？等等，问题不清楚。
因此，在中低海拔地区批量、重复培养性冬虫夏草需要大量的研究和实验工作。即使在高海拔地区进行大规模人工栽培冬虫夏草，仍然需要进行很多技术实验。因此，人工培育有性冬虫夏草，要实现规模化或工业化生产，还非常艰巨和遥远。
(2)人工培养无性冬虫夏草的现状
由于人工培育有性冬虫夏草难度太大，近10年来，大部分开展人工培育冬虫夏草的单位和科研人员都转向了无性的研究和应用。由于冬虫夏草的无性培养技术容易掌握，而且从自然界采集的冬虫夏草中分离的真菌大多具有与冬虫夏草有性成分相似的理化性质和药理作用，所以各地都把自行分离的真菌确定为冬虫夏草的无性阶段，并纷纷办厂生产菌粉，进行开发应用。目前，自然界中从冬虫夏草体内分离出的冬虫夏草有9属31种，其中北京、吉林、山西、上海、青海、浙江、福建、江西、广东、云南、贵州等40多个省(市)发现有16种。菌丝体和分生孢子的深层大规模发酵培养和固体培养作为有性冬虫夏草的替代品，部分厂家已进入大规模工业化生产，如凌志胶囊、金水宝胶囊、宁心宝胶囊、心肝宝、冬虫夏草鸡精、冬虫夏草胶囊、冬虫夏草酒、冬虫夏草人参滋补酒等20多种产品，年产值达1000万元至数亿元。而且，由于人工繁殖周期短，产量高，菌丝体和分生组织袍作为冬虫夏草有性替代品在未来具有很大的开发应用潜力。
为了获得冬、夏初和草的纯品系，必须进行人工分离、纯化、复壮和保存。
1.冬虫夏草的分离技术和条件
(1)材料要求。获得纯菌株需要严格的材料；一般来说，如果采用冬虫夏草的组织块分离法，最好的分离材料是每年65438+10月底至165438+10月收集的材料，此时青藏高原高寒草甸的土壤刚刚开始结冰。在这个时期，冬虫夏草刚刚感染蛾幼虫，进入僵死阶段的时间很短，嫩子芽刚刚长出虫头0.2-0.5cm，虫体内其他杂菌很少。若次年五、六月取材，僵虫体内及亚座内生活或腐生有多种杂菌，难以获得纯菌株。如果用子囊孢子进行分离培养，最好在每年的7月中下旬，子囊孢子刚刚部分成熟的时候收集分离材料。
(2)操作方法。有三个步骤。
A.僵虫(即菌核)分离:分离前先用水冲洗主体表面，再用无菌水冲洗2-3次；用0.65min438+0%-0.2%的氯化汞溶液对分离后的材料表面消毒约3-5分钟；然后用无菌水清洗。选择以胸部和脚部为边界的前部。用手术刀切掉表皮，避开消化道，将血腔中的菌丝切成芝麻状，压入平板培养基中，每皿1-2粒。在15-19℃培养。当菌落长到0.2-0.5cm时，选取少量菌丝，在平板培养基上反复纯化2-4次。确认无其他杂菌后，转入试管保存培养。
b、分离子芽:将洗净的子芽从僵虫顶部切下，放入0.1%氯化汞溶液中消毒2-3min，用无菌水洗净，切下中间的组织块，压入培养基中；培养条件与a相同。
C.子囊菌孢子分离:用透明纸袋覆盖子囊菌孢子成熟的基质，让子囊菌孢子弹起粘在纸袋上。然后将装有子囊菌孢子的纸袋浸入25%葡萄糖溶液中，洗去孢子，置于15-19℃培养，每天进行镜检。当袍子发芽后，用微量吸管将单个孢子吸到平板上进行培养。培养条件同a，或者可以将整个成熟的冬虫夏草带入室内，用棉纸包裹僵虫甚至虫的子座，只留下孕虫部分，在无菌室中水平放置载玻片，随时保持主体湿度；每天镜检，当子囊孢子弹到载玻片上时，用微量移液器吸到培养皿的培养基中进行培养；培养条件与a相同。
(3)培养基的选择。
A.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)是所有虫草真菌的通用培养基，在分离培养初期可以使用，但菌种生长不是很旺盛，容易老化退化。
b增菌培养基(1):多能蛋白脐带10g，葡萄糖50g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，活蚕蛹30g，生长素0.5μg，琼脂20g，水1000mL，pH: 5.0。
富集培养基(ⅱ):保藏蛋白40g、葡萄糖40g、去皮鲜马铃薯100g、磷酸氢二钾1g、硫酸镁0.5g、牛肉酱10g、生长素0.5μg、蝠蛾活幼虫(粉)30g、琼脂20g、高山草甸土浸出液1000ml等。
在强化培养基上，菌落比在PDA培养基上生长得更旺盛、更迅速。加福ⅱ优于ⅰ。
2.生长特性在冬虫夏草的分离培养中，需要掌握对温度、pH值、光照、碳氮源和无机盐的利用。
(1)不同温度对菌丝生长的影响。冬虫夏草喜欢低温。在0-4℃能缓慢生长；5-8℃时生长速度加快；10-19℃是该菌株的适宜生长发育范围；最适生长温度为15-19℃。当温度超过20℃时，菌丝生长迅速，菌落由白色变为灰黑色或棕黄色，并开始变异，因此不适合高温培养。
(2)对pH值的要求。冬虫夏草是一种酸性真菌，最适pH值为5.0-6.0。pH值在4.5以下，6以上时，会随着增减而缓慢增长或不增长。
(3)光线的影响。该菌株在子囊孢子萌发和菌丝生长的前期适应弱光和短光，后期适应强光。在人工培养中，菌丝、分生孢子和基质具有明显的趋光性，在向阳面生长密集，背光面生长稀疏，在全黑环境中培养的各种细菌细腻、细长、稀疏。
(4)碳源的利用。冬虫夏草可以利用多种碳源，但葡萄糖和麦芽糖一起使用时生长最快，单独使用葡萄糖时也能生长良好，其次是马铃薯、蔗糖等淀粉。
冬虫夏草是一种从寄生生活宿主生长到腐生阶段的真菌，因此可以很好地利用各种有机氮源。而活虫是最好的；蛋白胨和酵母膏混合使用对生长也非常理想，其次是各自单独使用，再其次是牛肉酱等等。而硫酸铵、硝酸钾等无机氮的利用率较差。对灰分养分有一定需求，在含微量硫酸镁和磷酸氢二钾的培养基中生长旺盛，其次是磷酸二氢钾，也可使用钠、钙、铁、铜等其他无机盐。
3.培养方法经过分离纯化，冬虫夏草可以作为各种实验和扩大生产应用。
(1)扩大其产量通常有三种方法:固体静置培养、摇瓶培养和大罐曝气发酵培养。
A.静态培养:主要用于固体培养，如管斜面、三角瓶培养、水稻培养等。在静态培养中，只要掌握好温度和光照，细菌就能正常生长。斜面上的分生孢子成熟后，可在1-2℃冰箱中保存8-14个月，也可直接作为种子用于生产。
B.振荡培养:液体培养和小规模繁殖培养均可。摇动培养基，从固体培养基中减去琼脂。最好选择恒温振荡培养机，将液体培养基放入三角瓶中，接种试管固体菌种进行培养。经过连续振荡，液体培养基中的各组分混合均匀，无沉淀，同时促进气液接触交换，使氧气进入液体培养基，有利于菌丝生长和分生孢子形成。
C.大罐通气发酵培养:大规模生产菌丝体、分生孢子等菌粉时，必须使用大罐通气发酵培养。在这种方法中，通过抽吸或真空泵减压进行曝气，并通过过滤器去除细菌，然后将其送入罐中的液体培养基中，用于冬虫夏草的生长和发育。
(2)发酵过程。天然冬虫夏草分离纯化→试管斜面种子→振荡液一级种子→二级种子→小型种子发酵罐→生产发酵罐→浓缩→喷粉干燥→成品菌粉。
冬虫夏草罐内发酵温度20-25℃，罐压392.3-686.5kPa(0.4-0.7kg/cmz)，通气量0.5-1.ovvm *。注入发酵罐的液体培养基应为罐容量的65%-75%。接种量为10%，搅拌速度为180转/分，培养时间为72-96h，使其可以浓缩和喷粉。
(3)多用途发酵培养基。鲜马铃薯(去皮)8%，蔗糖2%，玉米淀粉0.5%，蚕蛹粉1%，蛋白胨0.4%，硫酸铵0.2%，pH值5.5-6.0。
(4)发酵培养产品的标准。分生孢子几乎是完全分离的雌孢子梗。当孢子梗数没有明显增加时，每毫升分生孢子数为654.38±0.8亿~ 25亿。残糖低于1%；当氨基氮低于0.2mg/mL时，即可成为成品菌液。
4.冬虫夏草接种要点:给寄主昆虫接种有性或无性冬虫夏草孢子是人工培育有性冬虫夏草和无性菌株复壮的关键措施。
(1)回接期。冬虫夏草重接的关键是选择寄主昆虫的弱抗菌期，一是蜕皮期；二是幼虫摄食活动剧烈、摩擦损伤率高的时期。
(2)回接法。有两种。
A.喷洒方法:在蝠蛾幼虫4-6龄，65，438+0/3以上幼虫蜕皮时，集中幼虫，用5%-65，438+00%葡萄糖溶液喷洒在有子囊孢子或分生孢子的虫体或食物上。接种后，菌液在昆虫体上稍干30分钟左右，幼虫放回土壤中自然生活。这种方法感染率高，但缺点是幼虫不易从土壤中取出集中，集中时幼虫有自相残杀的习性。虫子被咬后，很容易被杂菌感染而死亡。当冬虫夏草的菌丝没有充满体腔时，受伤的虫体就会腐烂，不能形成刚性的虫体(菌核)。
B.自然接触法:在大面积半自然土壤中饲养蝠蛾幼虫，定期采取小样本观察幼虫的生长状况。当幼虫大部分适合被感染时，用饲料植物浸泡液种植并接种细土，均匀地撒在饲养昆虫的表面，然后喷水使细菌渗入土壤，使幼虫在取食活动中暴露于感染。这种方法感染率不太高，但一旦感染，冬虫夏草生长良好，未感染的蝠蛾幼虫也能正常生长繁殖。
(摘自杨·《中国昆虫资源的利用与产业化》)摘自《中国昆虫资源的利用与产业化》。
初夏草冬季栽培技术
(一)概述冬虫夏草别名，冬虫夏草，冬虫夏草。它是冬虫夏草(Berk。)Sacc。一种属于麦角科冬虫夏草属的植物，以及它的奇怪主人的干燥昆虫尸体。甘，文。养肺补肾，主要用于治疗肺结核、咯血、虚喘、盗汗、遗精、阳痿、腰膝酸软。多生于高山、草原、河谷、草地。分布在甘肃、青海、四川、云南、西藏等省区。
(2)植物特征冬虫夏草是寄生于鳞翅目蛾类幼虫的属于子囊菌纲、食肉目、麦角菌科和虫草属的真菌的组合。整个形状由虫体和子实体组成，外观为黄褐色或黄褐色。虫体很像蚕，细长圆柱形，长3 ~ 5厘米，厚0.3 ~ 1厘米，有20 ~ 30个明显的环节，腹部有8对，尤其中间有4对。子实体是指延伸到寄主昆虫外面的部分。经过菌丝的反复打结和分化，肉眼可以识别的生殖器官。质地脆，横切面黄白色，头红褐色，有子荚。子荚多单生，细长如棍，长4 ~ 10 cm，顶端膨大，表面褐色，质地稍韧，黄白色，横切面纤维状。子荚头部散生或密生有子囊菌，子囊菌内形成无数子囊菌，子囊菌是能有性繁殖的子囊孢子。
(3)生长特征冬虫夏草的分布与地形、地貌和海拔高度密切相关。其主要蛾类喜欢生长在潮湿、低温、阳光充足、排水良好的地形和地貌上。
(4)栽培技术
1，培养条件人工培养冬虫夏草主要是准备菌种和昆虫。
(1)菌种冬虫夏草的栽培首先要有优良的纯菌种，首先要早熟高产，主要目的是缩短生产周期，降低成本。二是要有传染性，要求菌株生命力强，存活率在95%以上，能迅速感染昆虫，尽快生病死亡。三是适应范围广，特别是对环境温度变化等杂菌感染。
(2)虫虫主要是利用蛾类巴贝斯虫的幼虫作为冬虫夏草的寄生虫。幼虫必须是活的、大的、肥胖的，数量取决于自己的养殖。一般每平方米需要幼虫1公斤，母种1粒，细沙50公斤，可长出鲜虫草0.5公斤，干品0.05克，价值100元。
(3)人工栽培环境冬虫夏草，不管海拔高低都可以，关键是温度。冬虫夏草是一种中低温真菌。菌丝生长和繁殖的最适温度为5 ~ 32℃，最适温度为12 ~ 18℃，菌核和基质形成的最适温度为10 ~ 25℃。
(4)栽培季节可利用自然温度，一年可栽培两次，春季3-5月，秋季9-165438+10月。如果室内控制温度，一年四季都可以栽培，生长期可以缩短。
2.栽培方法冬虫夏草的栽培方法有室内室外瓶栽、箱式栽培、床栽、露地栽培等多种。，而且你可以根据自己的条件选择任意一个。无论哪种栽培方式，栽培前都要先培养细菌和昆虫，让昆虫在入土前感染上这种携带病毒的菌液，入土后病得不能到处爬，有利于早死、快出苗、整齐生长。
菌虫的培养方法是用喷雾器将配制好的液体菌种喷在幼虫身上，每天喷两次，直到湿润为止。3天后，被菌液浸泡的幼虫出现呆滞、昏迷状态，可培养。
(1)瓶栽适合家庭栽培。普通罐头瓶子洗干净后，先在瓶子里放一层土壤含水量为60%的细沙，再把感染了菌液的幼虫放在上面。每个瓶子里放两个幼虫为宜。要求两仔鱼不靠近，腹面向下，表面拉伸，细沙覆盖3 cm，表面略平。为了保持湿润，要用塑料薄膜密封，并在合适的室内外温度下管理，避免阳光直射。
(2)箱型栽培也适合家庭栽培，大小木箱、塑料盆均可栽培。木箱底部和四周要有塑料薄膜，防止水分流失。先铺上5-7厘米厚的细沙，然后均匀地放上菌虫，每虫间距2-3厘米，再盖上3-5厘米的沙司。表面要用塑料薄膜保湿。为了节省空间，你也可以把木箱重叠起来。
(3)植床床架栽培是一种大规模生产的发展模式，一般适用于室内，可以充分利用室内空间进行架栽，节省空间。床架宽100 cm，根据自己房间的设计，采用竹木材质。每层四边高12 cm，用于挡土。栽培时先铺一层塑料薄膜，然后倒5-7厘米细沙压平，再放入菌虫，隔3-5厘米种在箱子里，再盖上塑料薄膜。
(4)露地栽培是指室外栽培。室外栽培的关键是选择好场地。一是要避免阳光直射和雨水侵蚀，达到能遮阳、排水、防旱、防止人畜践踏的环境。栽培方式有两种:平式或畦式。平地栽培是将宽度为100cm、长度不限的一般平地、盖地、荒地的表层土去掉，然后填入5 cm厚的沙子，按上述方法放入菌虫，用5-7 cm的细沙覆盖，用塑料薄膜覆盖。周围要有排水沟，上面要搭树或遮荫棚遮阴。
(5)畦耕畦耕可以避免阳光和高温的问题，适合农村耕种。边框宽度100 cm，深度50 cm，长度不限。周边也可以排水。栽培时，在畦底铺5厘米厚的细沙，然后按上述方法放入菌虫，再在细沙上盖5厘米，最后盖上塑料薄膜。边框旁用竹拱门，覆盖草帘遮阳降温。
3.管理技术冬虫夏草栽培后的管理技术很简单，主要是温度、湿度、光照、空气等方面。
(1)温度冬虫夏草对温度要求较宽，一般是先低后高，但太低了宁愿生长缓慢，太高了也不受影响。菌丝在12-18℃生长，但温度低时存活率高。一般-40℃不会冻死，高于40℃就会冻死，20 ~ 25℃有利于子体生长后期的生长。
(2)湿度和湿度管理是冬虫夏草生长发育的关键。昆虫体内的营养和湿度基本能满足其生长需求。它不需要外界的营养和湿度，只需要外界的物体就能保持昆虫身体不易干燥的温度。因此，随时保持沙子湿润为宜，含水量要达到60%。如果干燥，可以喷少量清水保持湿润。
(3)光照冬虫夏草栽培不需要强光，避光比较好，发育后期用散光比较好，但不能让阳光直射，特别是室外栽培，要用林荫、人工遮荫棚、草帘覆盖遮光。
(4)气传冬虫夏草菌丝体生长阶段不需要大量空气，特别是子座即将离地时，应立即揭去塑料薄膜，补充空气，以利于子座生长，空气相对湿度保持在75% ~ 95%左右，采挖10 ~ 20天后成熟。
(5)采收加工在自然条件下，冬虫夏草的生长期一般为9个月，品种性状的成熟标准主要决定生长速度。当基质高3 ~ 5厘米，顶端发育成子囊果“毛笔尖”时即可采收。
采收方法:用竹竿、木杆轻挖根啤，挑出冬虫夏草，放入筐中。注意不要弄坏虫身和副座，更不要划伤虫身或副座。收获后，用水冲洗沉淀物，并及时放在阳光下或晒干。
加工方法:包装好的冬虫夏草是以松散的冬虫夏草为原料加工而成。也就是说，松散的冬虫夏草回潮后要拉直，每7 ~ 10条扎成小捆，用小火烘烤，直到完全干透。48小捆的尾部要放入铁格子，分三层包装，每层16件以上。挤出后要熏蒸干燥，商标要用红丝绳扎牢。按规范，每封冬虫夏草应保持在0.25g左右，用木箱包装，内村加一层防潮纸，用铁箍捆扎，存放在通风干燥处。
文章来源:唐汉中医药商业网
二、人工培育冬虫夏草:
人工培育至少要解决四个问题。
一个是压力。菌种多为来自自然界的冬虫夏草，通过常规分离培养获得。据研究，冬虫夏草有性形态发生过程中，需要一定的温度来满足体内复杂的生理变化所需的水分，温度和湿度存在相关性。在一定湿度下，缓慢或恒定的温度变化不利于子实体的提取，有性形态的发生必须进行低温加湿处理。福建省三明市真菌研究所经过多年的转筒培养，只长出未成熟的幼嫩子座。他们认为冬虫夏草的生成必须在蝙蝠蛾幼虫的一些活性物质参与下完成。
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